磺胺類藥物在豬肉中的殘留檢測(cè)——樣品前處理改善方法

1、合作實(shí)驗(yàn)單位：浙江省獸藥飼料監(jiān)察所、浙江省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心
2、依照方法：國(guó)家農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) NY5029—2001
3、樣品：豬肉
4、國(guó)標(biāo)規(guī)定的提取和純化過程如下：
稱取組織樣品5g(精確到0.1g)，加入乙腈25ml， 無水硫酸鈉少許（血清除外），勻漿后，以3000r/min 的速度離心5min。分離后的殘?jiān)儆?5ml 乙腈處理，振蕩10min 后，以3000r/min 的速度離心5min。合并兩次的上清液，加入正己烷30ml，振蕩10min 后，以3000r/min 的速度離心5min，取下層液體，加入正丙醇10ml，50 攝氏度下減壓干燥（1） ，殘留物用95%乙腈3ml 溶解，過Sep Pak 氧化鋁B 柱。用95%乙腈5ml 過柱，不收集，再用70%乙腈10ml 洗脫后，洗脫液中加入5ml 正丙醇，50C 下減壓干燥（2）后，殘留物用2.0ml流動(dòng)相溶解，所制樣液用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。
5、目前使用的儀器：
BUCHI 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀R-200+VACCUMBRAND 真空隔膜泵 2 套
6、實(shí)驗(yàn)過程中碰到的問題：
1) 處理的樣品數(shù)量大，平均每天處理60 個(gè)樣品，每次20～30ml 樣品量；每天同時(shí)用2 套旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀處理，2 個(gè)人平均每人每天處理30 次，每次蒸發(fā)大概需要8～10min(不含中間轉(zhuǎn)換時(shí)間)。操作過程繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)。
2) 無法進(jìn)行真空度控制，樣品在蒸發(fā)過程中容易暴沸。并且溶液來不及冷凝全部被帶到真空泵中。
7、解決方案：
使用的儀器：
BUCHI 12 位快速蒸發(fā)儀（Multivapor12）+BUCHI 真空隔膜泵（V-700）帶真空控制器（V-855）
       
選擇的實(shí)驗(yàn)：因?yàn)榈诙綔p壓干燥是含有30％的水較難蒸餾，所以我們直接選擇了第二步來做實(shí)驗(yàn)。蒸發(fā)的溶液：樣品＋10ml 70%乙腈（30％水）＋5ml 正丙醇，大概20ml處理的樣品數(shù)量：一次12 個(gè)操作過程：
1) 儀器連接、準(zhǔn)備完畢，Multivapor12 預(yù)熱到50C。
2) 將 12 個(gè)樣品分別倒入對(duì)應(yīng)編號(hào)的12 根樣品管。
3) 將 12 根樣品管放入儀器內(nèi)，蓋好真空蓋，開始旋轉(zhuǎn)。
4) 在真空控制器 V-855 上設(shè)置減壓蒸餾的程序：常壓快速到250mbar,3min 內(nèi)到80mbar 維持10min,再降到40mbar（水在50C 時(shí)被蒸發(fā)出來的真空度
為40mbar—參考V-855 內(nèi)的溶劑數(shù)據(jù)庫）.
5) 按“開始”鍵后，真空泵開始按照程序抽真空。
6) 樣品蒸到盡干，實(shí)驗(yàn)結(jié)束
操作時(shí)間：整個(gè)操作時(shí)間25min 左右。
問題：在真空度40mbar 蒸餾水時(shí)，乙腈已被完全蒸出并冷凝到回收瓶?jī)?nèi)，但是乙腈在40mbar的真空度時(shí)會(huì)再次蒸發(fā)、暴沸，影響水的蒸餾速度。
解決辦法：
1）在接收瓶下放一盛有冰塊的杯子，提供更好的冷凝。
2）在蒸完乙腈后，停止蒸餾，將接收瓶倒空。然后直接將真空度降到40mbar蒸餾水。
結(jié)論：使用BUCHI 的12 位快速干燥儀只需要25min 就可以同時(shí)處理完12 個(gè)樣品，而且解決了在操作過程中不易控制的暴沸問題，并將大部分溶劑冷凝回收。