鎮靜劑類藥殘留測定方法（三）

時間：2023-03-25 01:11:19來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

鎮靜劑類藥殘留測定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(4)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

HPLC是現今最為常用的殘留檢測儀器之一。鎮靜劑類藥物的疏水性和不揮發性，通常適用反相HPLC法進行分離；而其具有紫外和熒光吸收結構特征，可以用紫外檢測器(ultravioletdetector，UVD)、二極管陣列檢測器( diode-array detector，DAD； photo-diode array detector， PDA)或熒光檢測器( fluorescence detector，FLD)檢測。

1)UVD

戴曉欣等建立了水產品中苯巴比妥殘留量的HPLC測定方法。采用乙腈-水(40+60，v/v)為流動相，在Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5um)色譜柱上分離，流速0.9mL/min，柱溫30℃，220nm波長檢測。在0.05～4.0 μg/mL范圍線性良好，相關系數為0.999；方法回收率在80.49%～ 102.42%之間，RSD為1.52%～10.15%；方法LOD為10 ug/kg， LOQ為30 μg/kg。

Aresta等建立尿液中地洛西泮的HPLC方法。色譜柱為Supelco sil LC-18-DB (250 mm× 4.6 mmi.d，5μm)，流動相為乙腈-水(65+35， v/v)，流速1 mL/min，室溫檢測，檢測波長為230 nm。方法LOD和LOQ分別為5 ng/mL和27 ng/mL，回收率為90%。

Tanaka等建立了測定血清中氯丙嗪、左米丙嗪、甲哌丙嗪、奮乃靜、異丙嗪等12種吩噻嗪類藥物的HPLC-UVD檢測法。Inersil ODS-SP (250mm×4.6mm， 5μm) C18反相色譜柱分離，乙腈-甲醇-30mmol/L磷酸二氫鈉(pH5.6) (300+200+500，v/v) 為流動相，流速0.9 mL/min，檢測波長250nm。方法回收率為87.6%～99.8%，LOD為3.2～ 5.5ng/mL。Holland 等3)建立了牛和豬腎臟中噻拉嗪及其代謝物(2，6-二甲苯胺)的HPLC-UVD測定方法。采用Bondapak phenyl 色譜柱分離，乙腈～乙酸鈉-乙酸溶液為流動相，UVD在225 nm檢測。兩種藥物回收率均大于78%，LOD為10 μg/kg，LOQ為25 μg/kg。

Zhang等建立了兔血漿中奧氮平、氟哌啶醇、氯丙嗪、齊拉西酮、利培酮等藥物的HPLC-UVD檢測方法。以丙咪嗪為內標，分析柱為Agilent Eclipse XDB C8 (150 mm×4.6 mm，5um)，流動相為乙腈和30 mmol/L醋酸銨(含0.05%三乙胺)，梯度洗脫，檢測波長為240 nm。方法LOD為2.0 μg/L，線性范圍為2.0～500.0 μg/L，相關系數為0.998，日內和日間CV均小于7.44%。Kishore 等建立了血液中卡馬西平、苯妥英鈉、魯米那和地西泮的HPLC檢測方法。采用Waters Spherisorb C18 ODS(10 um，4.6mm×250 mm)色譜柱分離，甲醇-乙腈-水(42+16+42，v/v)為流動相，UVD檢測波長為220 nm。方法回收率為98%～104%，日內和日間RSD均小于6.0%，LOD 在0.1～0.2g/L之間。魏晉梅等建立了HPLC同時測定羊肉中的11種鎮靜劑類藥物的方法。樣品用1%氨水-乙腈溶液超聲提取，色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18 (250 mm×4.6mm，5um)，以甲醇-0.1%甲酸為流動相進行梯度洗脫，檢測波長為245nm和254nm，進樣量10μL。甲苯噻嗪、唑吡坦、咔唑心安、氟哌啶醇、氯氮卓、丙酰丙嗪、氯丙嗪、奮乃靜、氟奮乃靜在0.02～200μg/mL范圍有良好的線性關系，奧沙西泮和氟哌利多分別在0.005～200μg/mL和0.05 ～200μug/mL范圍有良好的線性關系；11種藥物的平均回收率在64.0%～121.3%之間，RSD小于20%。

2) DAD/PDA

由于DAD/PDA能夠給出待測物的光譜信息，在定量檢測同時，可以初步定性并定量，不過檢測的靈敏度不如UVD。

洪月玲等測定豬肉及蝦肉中氯丙嗪，分析柱為SHIM PACKVP ODS色譜柱(150mm×4.6mm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸(7+3，v/v)，DAD檢測，檢測波長為254 nm。各組織回收率均大于85%，CV均小于10%，LOD為4μg/L。王海嬌等應用反相HPLC測定豬肉中的地西泮殘留，色譜柱采用C18柱(2mm×150mm，3μm)，流動相為甲醇-水-25mmol/L乙酸銨溶液(64.8+35.0+0.2，v/v)，流速0.5mL/min，DAD在波長254nm測定。在100～40μg/mL范圍內呈線性相關，平均回收率為80.8%，RSD小于5%。

3)FLD

FLD的靈敏度和選擇性都比UVD高，適合于具有熒光結構的藥物檢測。

Cerkvenik-Flajs等用HPLC-FLD測定動物腎臟中的阿扎哌隆及其代謝物阿扎哌酮。色譜分離采用Li Chrospher 60-RP反相液相色譜柱，流動相為pH 4.5 0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液-四氫呋喃-乙腈(60+5+35，v/v)和pH 4.5 0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，梯度洗脫，流速0.7 mL/min，熒光檢測激發波長為245nm，發射波長為345nm。方法定量線性范圍為10～ 150 μg/kg； LOD為1.2μg/kg和1.1μg/kg，LOQ為10μg/kg和5 μg/kg；平均回收率為88.2%(阿扎哌隆)和91.2%(阿扎哌酮)。

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