液相色譜紫外檢測法測定牛奶和奶粉中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素殘留量

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.5.1 適用范圍

適用于牛奶和奶粉中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素殘留量的測定。方法檢出限：牛奶中土霉素、四環素為5μg/kg、金霉素、強力霉素為10 ug/kg。奶粉中土霉素、四環素為25 μg/kg、金霉素、強力霉素為50 ug/kg。

12.2.5.2 方法原理

用0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取牛奶和奶粉中四環素族抗生素殘留，Oasis HLB或相當的固相萃取柱和羧酸型陽離子交換柱凈化，液相色譜儀測定，外標法定量。

12.2.5.3 試劑和材料

甲醇、乙腈：色譜純；磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)、檸檬酸(C6H8O7·H2O)、 乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA·2H2O)、草酸(C2H2O4·2H2O)： 分析純。

0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液：稱取71.63 g磷酸氫二鈉，用水溶解，定容至1000 mL。

0.1 mol/L檸檬酸溶液：稱取21.04g檸檬酸，用水溶解，定容至1000 mL。

Mcllvaine緩沖溶液：將625 mL 0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液與1000 mL 0.1 mol/L檸檬酸溶液混合，必要時用NaOH或HCI調pH=4.0±0.05。

0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液：稱取60.50g乙二胺四乙酸二鈉(4.5) 放入1625 mL mellvaine緩沖溶液中，使其溶解，搖勻。

0.01 mol/L草酸溶液：稱取1.26g草酸，用水溶解，定容至1000 mL。

甲醇-水(1+19，v/v)：量取5 mL甲醇與95 mL水混勻。

0.01 mol/L草酸-乙腈溶液(1+1，v/v)： 量取50 mL草酸溶液與50 mL乙腈混勻。

土霉素、四環素、金霉素、強力霉素標準物質：純度大于等于96%。

0.1 mg/mL土霉素、四環素、金霉素、強力霉素標準儲備溶液：準確稱取適量的土霉素、四環素、金霉素、強力霉素標準物質，分別用甲醇配成0.1 mg/mL的標準儲備液。儲備液于-20℃保存。

土霉素、四環素、金霉素、強力霉素混合標準工作溶液：根據需要用流動相將土霉素、四環素、金霉素、強力霉素標準儲備液稀釋成所需濃度的混合標準工作溶液，儲存于冰箱中，每周配制。

Oasis HLB固相萃取柱或相當者： 500 mg， 6 mL。使用前分別用5 mL甲醇和10 mL水預處理，保持柱體濕潤。

羧酸型陽離子交換柱： 500 mg，6mL。 使用前用5 mL甲醇預處理，保持柱體濕潤。

12.2.5.4 儀器和設備

液相色譜儀：配有紫外檢測器；分析天平：感量0.1 mg，0.01g； 渦旋振蕩器；冷凍離心機：轉速大于5000 r/min；固相萃取裝置；真空泵；氮氣吹干儀； pH計：測量精度士0.02；刻度樣品管： 10 mL，精度為0.1 mL。

12.2.5.5樣品前處理

(1)試樣制備

將牛奶從冰箱中取出，放置至室溫，搖勻，備用。牛奶置于0～4℃冰箱中避光保存，奶粉常溫避光保存。

(2)提取

牛奶試樣稱取10g (精確到0.01 g)，置于50 mL具塞塑料離心管中。奶粉試樣稱取2g(精確到0.01 g)，置于50 mL具塞塑料離心管中。向試樣中加入20 mL 0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液，于渦旋振蕩器上混合2min，于10℃ ，5000 r/min離心10 min，上清液過濾至另一離心管中。殘渣中再加入20 mL緩沖溶液，重復提取一次，合并上清液。

(3)凈化

將上清液通過處理好的Oasis HLB柱，待上清液完全流出后，用5 mL甲醇-水淋洗，棄去全部流出液。減壓抽干5min，最后用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液于10mL樣品管中。

將收集的洗脫液通過羧酸型陽離子交換柱，待洗脫液全部流出后，用5 mL甲醇洗柱，減壓抽干，用4 mL 0.01 mol/L草酸-乙腈溶液洗脫，收集洗脫液于10 mL樣品管中，45℃氮氣吹至1.5mL左右，流動相定容至2mL，供液相色譜-紫外檢測器測定。

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