液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定河豚魚、鰻魚及烤鰻中9種糖皮質(zhì)激素殘留量

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

10.2.1.1 適用范圍

適用于河豚魚、鰻魚及烤鰻中9種糖皮質(zhì)激素(潑尼松龍、潑尼松、氫化可的松、可的松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氫可的松)殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。方法檢出限：潑尼松龍、潑尼松、氫化可的松、可的松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松為0.2μg/kg；倍氯米松、醋酸氟氫可的松為1.0μg/kg。

10.2.1.2 方法原理

河豚魚、鰻魚及烤鰻中潑尼松龍、潑尼松、氫化可的松、可的松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氫可的松9種糖皮質(zhì)激素殘留，加入無水硫酸鈉，用乙酸乙酯提取，提取液濃縮后，經(jīng)過硅膠固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標法定量。方法檢出限：潑尼松龍、潑尼松、氫化可的松、可的松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松為0.2μg/kg；倍氯米松、醋酸氟氫可的松為1.0μg/kg。

10.2.1.3 試劑和材料

甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正已烷、丙酮：色譜純；甲酸：優(yōu)級純。

丙酮-正己烷溶液：丙酮+正己烷(2+3，v/v)。量取200mL丙酮與300mL正已烷混勻。無水硫酸鈉：分析純。在650℃馬弗爐中灼燒6h，儲存于干燥器中。

潑尼松龍、潑尼松、氫化可的松、可的松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氫可的松(CAS：514-36-3)標準物質(zhì)：純度≥98%。

1.0mg/mL標準儲備溶液：分別準確稱取適量的糖皮質(zhì)激素標準物質(zhì)，用甲醇溶解，分別配制成1.0mg/mL儲備溶液。配成的標準儲備液應在溫度低于-20℃冰箱中保存。

5.0μg/mL標準工作溶液：分別準確吸取適量的糖皮質(zhì)激素標準儲備溶液，用甲醇分別配制成5.0μg/mL標準工作溶液。配成的標準工作溶液應在溫度低于4℃冰箱中保存。

混合標準工作溶液I：分別吸取適量的氫化可的松和可的松標準工作溶液，用甲醇配成濃度為0.05μg/mL的混合標準工作溶液。此溶液應在溫度低于4℃冰箱中保存。測定樣品使用時，用20%乙腈溶液將混合標準工作溶液I配成不同濃度的混合標準工作溶液。

混合標準工作溶液II：分別吸取適量的潑尼松龍、潑尼松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松倍氯米松、醋酸氟氫可的松標準工作溶液，用甲醇配成潑尼松龍、潑尼松、甲基潑尼松龍、倍他米松、地塞米松為0.05μg/mL，倍氯米松、醋酸氟氫可的松為0.25μg/mL的混合標準工作溶液。此溶液應在溫度低于4℃冰箱中保存。

基質(zhì)混合標準工作溶液：測定樣品使用時，用空白樣品提取液將混合標準工作溶液II配成不同濃度的基質(zhì)混合標準工作溶液。此溶液應現(xiàn)用現(xiàn)配。

CleanertSilica固相萃取柱或相當者：500mg，6mL。使用前用6mL正己烷預處理，保持柱體濕潤。

10.2.1.4 儀器和設備

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)；分析天平：感量0.1mg和0.01g；固相萃取真空裝置；真空泵：真空度應達到80kPa；均質(zhì)器；振蕩器；高速冷凍離心機：轉速13000r/min；旋轉蒸發(fā)器；氮氣濃縮儀；具塞塑料離心管：50mL；樣品管：10mL；梨形瓶：150mL。

10.2.1.5 樣品前處理

(1) 試樣制備

從全部樣品中取出有代表性樣品約1kg，充分攪碎，混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器內(nèi)。密封作為試樣，注明標記。在抽樣和制樣的操作過程中，應防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。將試樣于-18℃冷凍保存。

(2)提取

稱取5g試樣(精確到0.01g)，置于50mL具塞塑料離心管中，加入10g無水硫酸鈉，加25mL乙酸乙酯，用均質(zhì)器均質(zhì)1min，在振蕩器振蕩20min，以10000r/min離心10min，取上清液至梨形瓶中。再用25mL乙酸乙酯提取一次，合并上清液，用旋轉蒸發(fā)器于45℃水浴上減壓蒸發(fā)至近干，用1mL乙酸乙酯和5mL正己烷溶解。

(3)凈化

將提取液移至經(jīng)預處理的Cleanert Silica固相萃取柱中，用6mL正己烷洗滌梨形瓶和萃取柱，棄去全部流出液。減壓抽干1min，用6mL丙酮+正己烷(2+3，v/v)洗脫，收集洗脫液于10mL樣品管中，用氮氣濃縮儀吹干，用1mL 20%乙腈溶液溶解殘渣，以4000r/min離心5min，上清液過0.2μm濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

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