非甾類同化激素類藥殘留量測定方法（一）

時間：2023-03-25 03:37:06來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留量測定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

9.1.4.2 測定方法

目前，國內(nèi)外報道的動物源基質(zhì)中非甾類同化激素的檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、毛細管電泳法(CE)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、伏安法、流動注射-化學發(fā)光檢測法(FI-CL)以及免疫分析法(IA)等。

(1)伏安法(voltammetry)

伏安法是一種電化學分析方法，根據(jù)指示電極電位與通過電解池的電流之間的關(guān)系，而獲得分析結(jié)果，包括循環(huán)伏安法(cyclic voltammetry，CV)和差示脈沖伏安掃描法(differential pulse voltammetry，DVP)等。Biryol等利用酚羥基的電化學活性，分別研究了使用CV和DVP來檢測血清中的DES含量。結(jié)果顯示，CV的檢測范圍為2×10-5～6×10-4 mol/L，DVP的檢測范圍分別為1×10-5～1×10-3 mol/L(甲醇溶液)和4×10-5～6×10-4 mol/L(乙腈溶液)。CV的LOD為1.12×10-5 mol/L，DVP的LOD分別為8.85×10-6 mol/L(甲醇溶液)和1.14×10-mol/L(乙腈溶液)。

(2)流動注射-化學發(fā)光檢測法(flow injection-chemiluminescence，F(xiàn)I-CL)

CLD是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進行化學反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學反應(yīng)，故叫作化學發(fā)光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當?shù)幕瘜W發(fā)光試劑混合，引起化學反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強度與該物質(zhì)的濃度成正比。Zhang等報道了采用流動注射-化學發(fā)光(FI-CL)方法篩選肌肉、牛肉、羊肉和豬肉中的DES。樣品經(jīng)甲醇超聲輔助提取，三氯甲烷脫脂，在硫酸溶液中用鈰(IV)-羅丹明6G化學發(fā)光體系測定。該方法的線性范圍為0.75～1.12pg/mL，回收率為93.1%～104.5%，日內(nèi)和日間CV低于3.0%。

(3)毛細管電泳法(capillary electrophoresis，CE)

CE是一類以毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分離分析技術(shù)，具有分離度高、快速、進樣量少、有機溶劑消耗少、樣品前處理要求低，已用于多種基質(zhì)中非甾類同化激素殘留的檢測。但由于CE進樣量小，也限制了其檢測靈敏度。林子俺等建立了水產(chǎn)品中HES、DES及DIS殘留的CE-UVD檢測法，并研究了緩沖體系的酸度、濃度、添加劑、分離電壓、進樣時間以及溫度等對組分分離的影響。雌酚類物質(zhì)由于2個苯環(huán)上各有1個羥基，在堿性條件下極易電離形成帶負電荷的離子，有利于減緩遷移速率以達到分離，隨著pH的升高，毛細管內(nèi)層表面的負電荷增加，電滲流加大，遷移時間相應(yīng)縮短，但分離效果不顯著，當pH大于10.0時，被測組分的遷移時間逐漸增長，分離趨勢明顯。在檢測波長為200nm，分離電壓為20kV，運行緩沖液為50mmo/L硼砂-25mmol/L氫氧化鈉(pH12.3，含30%的N，N-二甲基甲酰胺)的條件下，3種目標組分在14min內(nèi)達到基線分離；HES、DES與DIS的質(zhì)量濃度與峰面積分別在210～120mg/L、110～100mg/L、110～100mg/L范圍內(nèi)呈良好線性，相關(guān)系數(shù)(r2)分別為0.9998、0.9992、0.9994；LOD為0.3～0.9mg/L。

(4)氣相色譜法(gas chromatography，GC)

非淄類同化激素可以采用GC進行分析，但必須在GC分析之前將其衍生成揮發(fā)性的衍生物。由于操作較為繁瑣，目前采用逐漸減少。Coffin等報道了用GC檢測動物組織中的DES殘留。利用DES溶解于堿性溶液的性質(zhì)，用NaOH溶液和三氯甲烷反復(fù)萃取，三氟醋酸酐作為衍生化試劑，電子捕獲檢測器(ECD)檢測。其檢測限可達2～10μg/L，回收率為70%～110%。Tirpenou等對Coffin的研究方法進行了改進。用苯溶液和NaOH溶液提取樣品中的DES，提取液經(jīng)硅膠柱凈化后檢測，回收率達到81%。Barkatina等使用中等極性的HP-50毛細管柱和ECD檢測肉和肉制品中DES等藥物殘留。樣品用乙醚提取，鹽酸酸化水解，經(jīng)硅膠柱分離，再用C18固相萃取柱凈化，然后經(jīng)三氟醋酸酐或七氟丁酸酐衍生化，GC檢測。該方法的LOD分別為0.2mg/L和0.3mg/L，回收率為75%～80%。

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