甾類同化激素類藥物殘留分析技術(shù)測定方法（六）

時間：2023-03-25 04:44:37來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

甾類同化激素類藥物殘留分析技術(shù)測定方法（六）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(7)組學技術(shù)

為了能夠高效地追蹤ASs濫用情況，有必要開發(fā)新的篩選技術(shù)進行非法藥物篩查。基于轉(zhuǎn)錄組學、蛋白質(zhì)組學、代謝組學等“omic”技術(shù)，可以通過間接檢測其生理作用的方法來發(fā)現(xiàn)蛋白同化激素濫用。

Riedmaier等介紹了應(yīng)用這些組學技術(shù)尋找ASs生物標志物(biomarker)及檢測其殘留的潛力。該研究組通過鑒定牛血細胞中潛在的基因表達生物標志物，監(jiān)管ASs使用。采用實時定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(qRT-PCR)定量mRNA基因表達改變，而血液細胞是尋找生物標志物的理想材料。據(jù)報道，ASs可影響不同血細胞的mRNA基因表達。試驗選擇18頭小母牛，平均分成兩組，每組9頭。一組為空白對照組，另一組給予醋酸群勃龍和雌二醇復(fù)方制劑，連續(xù)給藥39天。采取3個點血樣檢測其mRNA表達情況，通過生物標志物圖譜篩選候選基因。結(jié)果顯示，醋酸群勃龍和雌二醇能夠顯著影響甾體類受體(ER-a和GR-a)、細胞凋亡調(diào)控元件Fas、炎性白細胞介素(IL-1a、IL-1β、IL-6)、MHCII、CK、MTPN、RBM5和β-肌動蛋白mRNA基因的表達。通過主成分分析(PCA)顯示這些基因是血液中醋酸群勃龍和雌二醇聯(lián)合使用的潛在標志物。

2011年，Anizan等采用甾體類靶向II相代謝物分析，調(diào)查分析了動物繁殖過程中天然甾體類固醇激素濫用情況。研究采用給動物外源給藥雄烯二酮，尋找潛在的生物標志物，監(jiān)測甾體類固醇激素在動物體內(nèi)的殘留狀況。該研究首次建立了樣品制備方法，尿液需先凍干，然后加入純水溶解，經(jīng)乙酸乙酯LLE提取，SAX固相萃取柱凈化，用水和甲醇-水(25+75，v/v)進行淋洗，用0.2%甲酸甲醇和10%氨化甲醇分別進行洗脫，氮氣吹干后，甲醇-水(20+80，v/v)復(fù)溶，UPLC-MS/MS測定，結(jié)果篩選到葡萄糖醛酸本膽烷醇酮、硫酸表雄酮等代謝產(chǎn)物。Regal等通過HPLC-線性離子阱靜電場軌道阱組合式高分辨質(zhì)譜(LTQ-Orbitrap)來獲取代謝物組學數(shù)據(jù)。血清樣品從飼養(yǎng)的奶牛中收集，或者從畜牧飼養(yǎng)不使用性激素(雌二醇-17 β或其酯苯甲酸雌二醇和孕激素)的奶牛中收集。經(jīng)過適當?shù)臄?shù)據(jù)處理和多變量統(tǒng)計分析(OPLS-DA)，有可能突出重要的血清代謝修飾，從而管理雌二醇和孕激素的使用。這些差異被用來建立預(yù)測模型，去監(jiān)控管理這些激素在牛中的非法使用。雌激素和孕激素的潛在生物標志物被指出，但還需要結(jié)構(gòu)解釋和說明。

基于ASs引起的生理學變化，采用組學技術(shù)開發(fā)新的篩選方法，并用于檢測其殘留含量，這項技術(shù)將極具前景。一些非常靈敏的方法，如定量RT-PCR、質(zhì)譜，能夠定量基因、蛋白表達或代謝物的細微變化，在生物信息學統(tǒng)計工具的幫助下，可以從實驗數(shù)據(jù)中獲取有價值的信息。總之，利用組學技術(shù)發(fā)現(xiàn)新的物質(zhì)、監(jiān)測畜牧業(yè)藥物濫用，將是未來的挑戰(zhàn)。

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