磺胺類藥物殘留分析技術（五）

時間：2023-03-25 08:02:55來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

磺胺類藥物殘留分析技術（五）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

3)免疫親和色譜(immunoaffinity chromatography，IAC)

IAC以抗原抗體的特異性、可逆性免疫結合反應為基礎，當含有待測組分的樣品通過IAC柱時，固定抗體選擇性地結合待測物，其他不被識別的樣品雜質則不受阻礙地流出IAC柱，經洗滌除去雜質后將抗原-抗體復合物解離，待測物被洗脫，樣品得到凈化。其優(yōu)點在于對目標化合物的高效、高選擇性保留能力，特別適用于復雜樣品痕量組分的凈化與富集。

Li等用SAs多克隆抗血清制成IAC柱來凈化豬肉中的SAs殘留。在4-氨基苯磺胺N1位連接間隔臂制得抗SAs特異性抗體，與免疫吸附劑混合制備IAC柱，用于凈化豬肉中SMM、SDM和SQX。樣品用甲醇-水(8+2，v/v)提取，過IAC凈化后，用HPLC-UVD檢測。該方法的LOD為1～2μg/kg：在10～100ug/kg添加濃度內，回收率為70.8%～94.1%，RSD在3.4%～12.9%之間。龔明輝利用抗SM2簇特異性單克隆抗體制備了lAC柱，對雞肉中的SM2、SDM和SM1進行測定。利用高親和力SM2單克隆抗體與溴化氰活化的Sepharose4B進行偶聯(lián)，制備免疫親和吸附劑，對3種SAs的動態(tài)柱容量為195～16181ng/mL gel，絕對柱容量為335～404ng/mg lgG。該IAC柱每三天使用一次，重復12次后，SM2的柱容量仍能達到795ng/mL gel，滿足SAs殘留分析的要求。雞肉樣品經甲醇水(8+2，v/v)提取，取一半提取液，加35mLPBS稀釋，過IAC柱凈化，用4mL甲醇洗脫，HPLC-UVD檢測。該方法的LOD為3ug/kg，在10～50ug/kg添加濃度，回收率為75.4%～98.5%，RSD小于7.4%。Li等以SMZ為半抗原制備單克隆抗體，該單克隆抗體對6種SAs的交差率在31%～112%之間，與溴化氰活化的Sepharose4B進行偶聯(lián)，獲得的免疫親和吸附劑來制備IAC柱，該IAC柱對13種喹諾酮和6種SAs具有吸附性。用該IAC柱凈化豬肉和雞肉中的6種SAs，LC-MS/MS檢測，方法回收率為72.6%～107.6%，RSD為11.3%～15.4%，LOQ為0.5～3ug/kg。

4)QuEChERS(Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe)

QuEChERS是由美國農業(yè)部Anastasiades教授于2003年開發(fā)的，一種用于農產品檢測的快速樣品前處理技術。其原理與HPLC和SPE相似，利用吸附劑填料與基質中的雜質相互作用，吸附雜質從而達到除雜凈化的目的。具有回收率高，精確度好：可分析的化合物范圍廣；分析速度快；溶劑使用量少，污染小；操作簡便；裝置簡單等優(yōu)勢。

李鋒格等建立了一種基于QuEChERS前處理技術的UPLC-MS/MS殘留分析方法，用于測定雞肝中12種SAs、19種喹諾酮類和8種苯并咪唑類藥物及其代謝物。樣品用1%乙酸乙腈溶液提取，4.5mL提取液中加入200mg氨基(NH2)吸附劑，渦旋2min，4500r/min離心10min，移取3mL上清液氮氣吹干，加入1mL甲醇-DMSO-水(10+50+40，v/v)復溶，加入2mL正己烷脫脂，過濾后LC-MS/MS測定。39種藥物在5～100ug/kg添加濃度范圍內線性良好(2>0.98)；在10～50ug/kg添加水平范圍內，平均回收率為72%～121%，RSD為1.5%～23.4%；39種藥物的LOD為5μg/kg，LOQ為10ug/kg。曲斌等引也建立了一種以QuEChERS方法作為樣品前處理技術的UPLC-MS/MS方法，測定豬肝中20種SAs殘留。豬肝樣品以SDM-D6為內標，置于DisQuE萃取管(50mL，內含4g硫酸鎂、1g氯化鈉、1g檸檬酸三鈉二水結晶鹽、0.5g檸檬酸氫二鈉半水結晶鹽)中，用乙腈提取，上清液加入DisQuE凈化管(15mL，內含900mg硫酸鎂、150mg PSA、150mg C18)凈化，上清液蒸干復溶后，用UPLC-MS/MS測定。在10～200ugkg范圍內，各藥物均呈良好的線性關系，高中低濃度回收率在70%～115%之間，精密度小于15%。Posyniak等開發(fā)了一種快速、低成本分析雞肉中6種SAs的HPLC方法。樣品用乙腈提取，1mL提取液中加入25mgC18吸附劑，混合振蕩，上清液蒸干后用pH3.5乙酸緩沖液復溶，熒光胺衍生化，HPLC-FLD測定。該方法回收率超過90%，LOD在1～5μg/kg之間。

5)分子印跡技術(molecular imprinting technology，MIT)

MIT利用模板分子(印跡分子)與聚合物單體接觸時會形成多重作用點，通過聚合過程這種作用就會被記憶下來，當模板分子除去后，聚合物中就形成了與模板分子空間構型相匹配的具有多重作用點的空穴，這樣的空穴將對模板分子及其類似物具有選擇識別特性，以此分子印跡聚合物(MIP)作為吸附凈化材料，建立選擇性樣品處理方法。

Xu等制備了一種新型的SM2的MIP-涂層攪拌棒，該MIP的涂層厚度大約為20um，RSD為6.7%。分別通過電子顯微鏡、紅外光譜掃描、熱重分析和耐溶劑性對MIP進行研究，與非印跡聚合物(NIP)-涂層作比較，對MIP-涂層的吸附容量和選擇性進行了詳細的評價，MIP-涂層表現出較高的吸附能力和選擇性。MIP-涂層的飽和吸附量是甲苯中NIP涂層的4.6倍以上，經MIP-涂層攪拌棒吸附萃取后，可以檢測到0.2μg/L的SM2。同時，該MIP-涂層對模板類似物也具有選擇性吸附能力。

以此建立了采用MIP-涂層攪拌棒吸附萃取生物樣品中8種SAs的HPLC測定方法，并對萃取條件(萃取溶劑、萃取時間、解吸溶劑、解吸時間和攪拌速度)進行了優(yōu)化。該方法的線性范圍分別為1.0～100μg/L，LOD為0.20～0.72ugL，已成功應用于豬肉、豬肝和雞肉樣品的分析。

6)在線自動凈化(automate online clean up)

在線自動凈化具有SPE的高富集性，同時具有提取時間少、有機溶劑用量少和重現性好等優(yōu)點。

Naoto等開發(fā)了雞蛋中SMZ、SMM、SDM和SQ的在線自動分析方法。雞蛋樣品采用Ultrafree-MC/PL離心式超濾系統(tǒng)處理，以MightysilRP-4GP作為色譜柱，流動相為28%乙醇溶液，光電二極管陣列檢測器(PDA)檢測。一個樣品的分析時間小于30min，乙醇的用量小于5mL。在添加濃度0.1ppm、0.2ppm、0.4ppm和1.0 ppm水平，方法回收率優(yōu)于80.9%，RSD在1.3%～4.7%之間；SMZ的LOQ為0.060ppm，SMM為0.045ppm，SDM為0.044 ppm，SQ為0.093。Pereira等169建立了同時在線凈化檢測牛奶中SMX和TMP的二維HPLC法。牛奶樣品離心后，取15uL直接注入柱切換HPLC系統(tǒng)，先過RAMC18-BSA柱，0～5min用0.01mol/L pH6.0磷酸鹽緩沖液-乙腈(95+5，v/v)沖洗，去除蛋白，5min 后用0.01mol/L pH6.0磷酸鹽緩沖液-乙腈(83+17，v/v)沖洗，將分析物沖入C18分析柱；再以0.01mol/L pH5.0磷酸鹽緩沖液-乙腈(82+18，v/v)為流動相，分離分析，UVD在265nm處檢測。SMX和TMP的線性范圍分別為25～800ng/mL和50～400ng/mLLOD分別為15ng/kg、25ng/kg；不同濃度樣品添加回收率為94.4%～103.5%，CV小于15%。Fang等建立了在線SPE-HPLC檢測方法，可同時檢測雞蛋、豬肉中的SM1；等10種SAs。HPLC原有的進樣六通閥被替換為在線的預濃縮柱，SAs在柱上富集，然后被流動相洗脫。整個樣品分析過程在35min內完成。混合標準溶液濃度為1ng/mL時，方法CV在2.5%～7.8%之間：添加濃度為4ugkg、6ug/kg、8ug/kg時，雞蛋的回收率為69.5%～81.47%，豬肉的回收率為66.35%～85.59%。

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