IDA-殼聚糖金屬螯合吸附劑

[db:作者] / 2023-01-05 00:00

IDA-殼聚糖金屬螯合吸附劑

固定化金屬親和層析法(Immobilized Metal AffinityChromatography,簡稱IMAC)具有螯合介質吸附容量大，選擇性及通用性較好，易于再生，成本低等優點，逐漸成為分離純化蛋白質等生物工程產品最有效的技術之一。隨著基因工程的發展，通過基因融合表達策略可大量制備N-端或C-端融合了6個組氨酸的目標重組蛋白質。

固定化金屬親和吸附劑是固定化金屬親和層析成功的關鍵。殼聚糖是來源豐富的環境可再生資源，具有良好的生物相容性。將殼聚糖用作蛋白質分離純化和酶固定化基質材料具有很好的應用前景。王曉軍選用殼聚糖為基質載體、戊二醛為交聯劑、環氧氯丙烷為活化劑、亞氨基二乙酸(IDA)為螯合配基制備金屬螯合親和吸附劑，研究了制備過程中各因素對吸附劑吸附性能的影響。

殼聚糖載體親和吸附劑的制備：

①交聯。稱取一定量殼聚糖，加入1% (體積分數)的CH3COOH溶液，攪拌至完全溶解。滴入一定量戊二醛，攪拌交聯4h。在快速攪拌下加入2mol/L的NaOH溶液，將pH值調至8.0附近，使殼聚糖呈顆粒狀沉淀。收集沉淀，水洗至中性，加入NaOH攪拌還原40min，水洗至中性，抽濾。

②活化。取一定量交聯殼聚糖加入一定比例和濃度的NaOH與二甲亞砜(DMSO)的混合溶液中。充分攪勻，25℃下緩慢滴加1.2mL體積比為0.3的環氧氯丙烷，升溫至40℃，170r/min下振蕩反應一段時間，用大量水洗至中性，濾干。

③螯合配基的鍵合。取13.31gIDA，8gNaOH溶解至100mL，向活化后的交聯殼聚糖中加入一定體積后定容至50 mL，在恒溫振蕩器中于一定溫度反應一段時間。洗滌至中性，用布氏漏斗抽干，得殼聚糖螯合凝膠。

④取螯合凝膠裝柱(1. 3cm×15cm)，用0.1mol/L的CuSO4溶液灌流，凝膠柱螯合銅離子至飽和后用0.05mol/L，pH值為7.5的Tris.HCI緩沖液清洗，可得到鰲合銅離子的親和吸附劑，然后再測定一些因素對其的影響。

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