吡唑酮類藥殘留測定——免疫分析法

時間：2023-03-25 00:47:54來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

吡唑酮類藥殘留測定——免疫分析法

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(8)免疫分析法(immunoanalysis，IA)

免疫分析方法具有快速簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，主要用于篩選檢測。吡唑酮類藥物的免疫學(xué)方法研究主要是放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)，集中于20世紀(jì)80年代左右，近年來報(bào)道較少。RIA的原理是放射性標(biāo)記抗原和未標(biāo)記抗原(待測物)與不足量的特異性抗體競爭性地結(jié)合，反應(yīng)后分離并測量放射性，而求得未標(biāo)記抗原的量。

Takatori等最早制備4-重氮基安替比林免疫原。AA在酸性條件下，冰浴，將氨基重氮化，生成4-重氮基安替比林，再在堿性條件下與牛血清白蛋白偶聯(lián)，多次免疫家兔獲得安替比林抗體，建立了吡唑酮類藥物RIA方法。通過[3H]標(biāo)記的安替比林和未標(biāo)記安替比林競爭性結(jié)合安替比林特異性兔抗血清，檢測[3H]標(biāo)記的安替比林進(jìn)行定量，方法LOD為1ng，但未對實(shí)際樣品進(jìn)行測定。Takatori等還制備了琥珀酸酐安替比林抗原。由于安替比林缺乏與蛋白偶聯(lián)的活性基團(tuán)，而其代謝物AA則含有活性氨基。將AA和琥珀酸酐分別溶解于二氯甲烷，再將二者混合，室溫下反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用硅膠薄層層析，展開劑為甲醇氯仿(90+10，v/v)，收取4-氨基琥珀酸酐-安替比林，再與氯甲酸異丁酯衍生，衍生產(chǎn)物直接與牛血清蛋白偶聯(lián)，獲得完全抗原，再免疫家兔，獲得抗體。該抗體的IC50分別為：安替比林6.8ng/mL，AA6.4ng/mL，安乃近2820ng/mL，氨丙吡酮8.5ng/mL，安乃近35.5ng/mL，IPA 1320 ng/mL，氨基比林2820ng/mL。以此建立的RIA方法，安替比林的LOD為1ng/mL，與其他吡唑酮類藥物無交叉反應(yīng)，但未對生物樣品進(jìn)行測定。

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