糖皮質(zhì)激素類藥殘留分析技術(shù)測定方法——毛細(xì)管電泳法

時間：2023-03-25 03:03:45來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

糖皮質(zhì)激素類藥殘留分析技術(shù)測定方法——毛細(xì)管電泳法

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

10.1.4.2 測定方法

GCs的測定方法主要有毛細(xì)管電泳法(CE)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)、氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS)和免疫學(xué)方法(IA)等。

(1)毛細(xì)管電泳法(capillary electrophoresis，CE)

1)毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capillary zone electrophoresis，CZE)

CZE是CE中最常見的分離模式，是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為。上的差異而實現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。CZE用以分析帶電溶質(zhì)，樣品中各個組分因為遷移率不同而分成不同的區(qū)帶。Baeyens等建立了檢測淚液中地塞米松磷酸鈉及其代謝物地塞米松的CZE方法。電泳緩沖液為100mmol/L四硼酸鈉緩沖液，電壓為25kV，5kPa壓力進(jìn)樣，時間20s，毛細(xì)管柱的總長度為64.5cm、有效長度為56.0cm、內(nèi)徑為50um、外徑為375um，柱溫為25℃，二極管陣列(DAD)檢測器在190～600nm全波長掃描。該方法的LOD和LOQ分別為0.5μg/mL和2.0μg/mL，線性范圍為2～100ug/mL。

2)毛細(xì)管膠束電動力學(xué)色譜(micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC)

MECC為一種基于膠束增溶和電動遷移的新型液體色譜，在緩沖液中加入離子型表面活性劑作為膠束劑，利用溶質(zhì)分子在水相和膠束相分配的差異進(jìn)行分離。MECC柱效高，流行平面沒有譜帶擴(kuò)展，散熱好，膠束本身處于動態(tài)，和離子接觸多，分離效率高。由于應(yīng)用的表面活性劑的種類不同，明顯改變分離效果，加有機(jī)感性劑，可改變MECC選擇性，從而大大提高分離效能。適合于中性物質(zhì)的分離，還可以分析離子，亦可區(qū)別手性化合物，而且，成本低，操作簡單。Noe等建立了檢測血清中潑尼松龍的MECC方法。血清樣品經(jīng)C18固相萃取柱凈化，在一-定的壓力(20mbar，0.06min)下注入熔融石英毛細(xì)管(id.50mm，總長度66cm，有效長度49.5cm)，自動進(jìn)樣器的溫度為20℃±0.1℃，毛細(xì)管爐的溫度為25℃±0.1℃，采用30kV恒壓(電流為65mA)在10min內(nèi)分離，磷酸鹽-四硼酸鹽緩沖液(pH8.0，20mmol/L)用于定量測定潑尼松龍，紫外檢測器(UVD)在254nm檢測。該方法的線性范圍為0.5～4μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.990，LOD為250ng/mL，LOQ為500ng/mL。

3)加壓毛細(xì)管電色譜(pressurized capillary electrochromatography，pCEC)

pCEC是近年發(fā)展起來的一種新型微分離分析技術(shù)，它整合了CE與HPLC的優(yōu)點，通過在填充有HPLC填料的毛細(xì)管電色譜柱兩端施加高壓直流電場，樣品在CE柱中的保留行為同時受到電滲流及其在流動相與固定相之間分配系數(shù)的影響，雙重分離機(jī)制大大提高了樣品分離能力，適用于復(fù)雜生物樣品中待測物的分離。結(jié)合毛細(xì)管柱上檢測技術(shù)，pCEC可與UVD、熒光檢測器(FLD)、激光誘導(dǎo)熒光檢測器(LIF)、電化學(xué)檢測器(ECD)及質(zhì)譜(MS)等多種檢測手段聯(lián)用。李博祥等采用反相pCEC-UVD技術(shù)，建立了一種高效、簡便的GCs分析方法，適用于毛發(fā)中GCs的檢測。使用C18反相毛細(xì)管填充柱(內(nèi)徑100um，毛細(xì)管全長45cm，有效長度20cm，ODS填料粒徑3um)，流動相為1.5mmol/L的Tris-乙腈溶液(pH8.0，65+35，v/v)，檢測波長為245nm、分離電壓為-10kV、反壓閥壓力為10.5MPa、泵流速為0.05mL/min，進(jìn)行等度洗脫，倍他米松、地塞米松、潑尼松、潑尼松龍、醋酸潑尼松龍、醋酸氫化可的松、醋酸可的松、皮質(zhì)脂酮等8種GCs在20min內(nèi)實現(xiàn)快速分離。各組分的質(zhì)量濃度線性范圍達(dá)到3個數(shù)量級，遷移時間和峰面積的RSD分別小于4.8%和7.4%；不同濃度GCs的回收率為71%～85%；方法LOQ分別為:潑尼松龍0.72ug/g、潑尼松0.72ug/g、倍他米松0.59μg/g、地塞米松1.37ug/g、醋酸可的松1.41μg/g、醋酸潑尼松龍1.07ug/g、醋酸氫化可的松1.03ug/g、皮質(zhì)脂酮1.36μg/g。

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