阿維菌素類藥物殘留測定方法（三）

時間：2023-03-24 21:00:01來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

阿維菌素類藥物殘留測定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

(4)液相色譜-質譜法(liquid chromatography mass spectrometry，LC-MS)

由于檢測器選擇性的限制，HPLC方法存在靈敏度相對較低的缺點。隨著電噴霧電離(ESI)及大氣壓化學電離(APCI)技術的快速發展，單四極桿(MS)、離子阱(MSn)、三重四極桿(MS/MS)、飛行時間(TOF)等分析器的相繼出現，不僅使AVMs的檢測靈敏度提高，而且能方便地對AVMs，多殘留組分進行同時檢測。同時，根據MS提供的離子信息，能夠進行結構確證。[M-H]-、[M+H]+和[M+Na]+加合離子是LC-MS分析中常選用的監測離子。IVM的裂解方式(圖21-2)代表了AVMs的分子裂解機理。LC-MS已成為目前AVMs殘留分析的首選。

圖21-2 IVM的主要裂解途徑

1)液相色譜-單級質譜法(LC-MS)

早期報道的AVMs確證技術主要采用LC-MS方法，且主要選用APCI源。Heller等采用LC-粒子束電離源(PBI)-MS在負離子化學電離(NCI)方式下檢測牛奶和牛肝中的IVM。樣品提取液經在線堿性氧化鋁柱凈化后，進LC-MS測定，用小孔徑的C18色譜柱分離，梯度洗脫，流動相中加入適量的醋酸銨提高離子化效率。選擇離子監測(SIM)模式下，檢測IVM母離子和4個碎片離子進行確證。由于存在一定的基質效應，采用基質匹配標準曲線定量。該方法的LOD為4ng。Wu等報道了豬肝中AVM和IVM的檢測方法。樣品提取液用IAC柱凈化后，進LC-MS檢測。色譜柱為Zorbax Eclipse XDB-Cs柱，甲醇-水(85+15，v/v)為流動相，流速0.5mL/min，采用APCI源，在負離子模式下監測[M-H]-離子。添加水平在5～100μg/kg時，AVM和IVM的平均回收率分別為74%～94%，65%～87%。其LOD均為5μg/kg。Ali等開發了牛肝中EPR、M0OX、AVM、DOR和IVM的多殘留檢測方法。樣品的乙腈提取液用C8柱和堿性氧化鋁柱凈化后進LC-MS測定。采用APCI源，正離子模式監測，通過與標準溶液或陽性添加樣品的保留時間和離子豐度的比較來定性。采用該方法對添加濃度為25ppb的陽性控制樣品進行了確證。Turmipseed等采用LC-非放電APCI(ND-APCI)-MS來檢測AVM。采用商業化的LC-APCI源，但關掉了電暈放電。與常規ESI和APCI源相比，該電離方式是利用藥物在溶液中形成的陽離子或Na加合離子，對某些化合物而言，ND-APCI源具有更高的靈敏度和選擇性。作者采用該技術成功分析了牛奶中的AVM。

2)液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)

LC-MS/MS可以采用APCI、ESI和APPI三種電離源。

A.APCI源

Howells等建立了牛肝臟中AVMs的定量和確證方法。為便于陰離子的形成，分析物在堿性pH下進行LC分離，APCI電離負離子模式監測，MSn多級質譜分析，每個母離子各監測2個子離子。

EPR、AVM、DOR、MOX和IVM的CCB分別為3.1ng/g、3.2ng/g、2.2ng/g、4.0ng/g和3.2ng/g，平均回收率分別為70.9%、69.1%、65.9%、69.7%和73.2%，RSD為11.6%、3.9%、6.4%、9.3%和10.5%。Campillo等報道了牛奶中EPR、AVM、DOR、MOX和IVM的分析方法。樣品提取液進LC-MSn，采用APCI源電離，負離子模式，多級質譜檢測。方法LOQ為0.1～2.4ng/g，回收率在89.5%～105%之間，RSD小于9%。

B. ESI源

ESI是目前AVMs的LC-MS分析中最常采用的電離方式。

Hino等在ESI正離子模式下檢測牛肝中AVM、IVM、EPR、DOR和MOX殘留。分析物用TSK-GEL ODS 100V色譜柱分離，乙腈和含0.1%甲酸的0.1mmol/L甲酸銨溶液為流動相，梯度洗脫，流速0.2mL/min，多反應監測模式(MRM)檢測，基質匹配標準曲線定量。方法回收率在87.9%～99.8%之間，日內精密度為1.5%～7.4%，日間為1.5%～8.4%。鄭衛東等采用LC-MS/MS同時測定豬肝臟中AVM和IVM的殘留量。樣品提取凈化后，進儀器分析。ESI電離正離子，MRM模式檢測，以保留時間和子離子比定性，外標法定量。方法LOD均為2.0μg/kg，LOQ為5.0μg/kg；添加水平在2～20μg/kg范圍內，AVM和IVM的平均回收率分別為77.0%～83.3%和76.9%～79.8%，RSD分別小于12.1%和13.0%。Rubensam等報道了采用LC-MS/MS確證分析牛肉中AVMs的殘留分析方法。樣品經溶劑提取，低溫冷凍除脂后，LC-MS/MS確證檢測。方法平均回收率為88.9%～100.7%，重復性CV為0.78%～5.1%，重現性CV為0.28%～9.0%；方法靈敏度滿足MRLs要求。Hernando等開發了鮭魚肌肉中AVM、IVM、DOR的LC-MSMS測定方法。樣品用乙腈提取，氧化鋁柱凈化后進樣分析。采用粒徑1.8um的小顆粒填料色譜柱分離，再進混合四極桿/線性離子阱(QqQ(LIT))系統，ESI電離，通過線性加速(LINAC)高壓碰撞室，允許MS在MRM模式下快速掃描采集。作者對減少駐留時間對譜圖質量和靈敏度的影響進行了評估，當駐留時間由50ms減小到10～20ms，譜峰面積和信噪比都有增加。方法靈敏度優于μg/kg級別，樣品處理中不需要濃縮，儀器的定量限(ILQ)為0.15～5ppb；采用基質匹配標準曲線定量，方法回收率為80%～95%。

Dahiya等建立了牛奶中IVM、DOR和MOX的分析方法。LC-MS/MS采用ESI正離子、MRM模式，檢測碎片離子:892.71>569.6、892.71>551.5(IVM)，916.88>593.83、916.88>331.40(DOR)，640.85>199.03、640.85>498.61(M0X)。IVM、DOR和MOX的LOD分別為0.1、0.1和0.2μg/kg，LOQ分別為0.2、0.2和0.5μg/kg。Sheridan等報道了快速檢測牛奶中AVM、IVM、DOR、EPR和MOX的多殘留分析方法。樣品用乙腈提取后，LC-MS/MS進行定性、定量分離檢測，質譜選用ESI正離子監測。該方法LOD為0.016～0.117μg/kg。Durden等采用LC-MS/MS測定了牛奶中的AVM、DOR、EPR、IVM和MOX。AVM、DOR和IVM結構中只含有C、H、O元素，可以用ESI負離子模式監測；其他藥物含有N元素，可以用ESI正離子模式監測。作者對正、負兩種電離方式進行了比較。在負離子模式下，采用三乙胺-乙腈為流動相，以SEL為內標，AVM、DOR、IVM、EPR和MOX的線性范圍為1～60μg/kg，方法LOD為0.19～0.38μg/kg；當以甲酸-甲酸銨-乙腈為流動相，正離子模式下檢測時，具有最佳的靈敏度，線性范圍為0.5～60ug/kg，方法LOD為0.06～0.32μg/kg；但負離子監測的線性更好，更穩定。Frenich等報道了采用超高效液相色譜-電噴霧-串聯質譜(UPLC-ESI-MS/MS)方法檢測雞蛋中IVM的殘留分析方法。方法回收率在60%～119%之間，RSD小于25%，LOQ低于5μg/kg。

Wang等建立了豬肉、豬肝、魚肉和牛奶中AVM、IVM、DOR和EPR的測定方法。分析物用UPLC分離，在ESI電離、正離子，MRM模式下檢測，整個分析時間在3.5min以內。采用基質匹配標準曲線定量，4種AVMs的LOD和LOQ分別為0.05～0.68μg/kg和0.17～2.27μg/kg；方法回收率在62.4%～104.5%之間。

C.APPI源

Turnipseed等報道了采用LC-MSn多級質譜技術檢測牛奶中EPR、IVM、DOR、MOX的殘留分析方法。樣品用乙腈提取，C18柱凈化后，LC-MSn檢測。作者對大氣壓光化電離源(APPI)電離、APPI/APCI復合電離和ESI電離的響應強度進行了比較，發現與藥物性質和流動相構成有關。當監測負離子時，使用紫外燈可以增加MS的響應；然而，采用APPI/APCI復合電離源，正離子監測，且關掉電暈放電電流，無論是否打開紫外燈時，能夠獲得最佳響應值。采用MSn多級技術確證。當EPR和IVM在添加水平1～20μg/kg，DOR和MOX在5～20μg/kg時，方法回收率大于60%，RSD小于20%。

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