食品基因定量檢測

時間：2023-03-23 23:21:21來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

　　轉(zhuǎn)基因檢測既是對轉(zhuǎn)入的特定基因進行檢測，通過引物將特定的啟動子和終止子合成，并在之后檢測中表現(xiàn)出來，所使用的方法通常是凝膠PCR、RTPCR、LAMP、NASBA等等　　(1)定性PCR技術(shù)在DNA的提取中，要為上述的啟動子和終止子外源基因配備引物，通過有效的儀器對待檢測的轉(zhuǎn)基因食品的NDA進行適當?shù)臄U增。判定的依據(jù)就是有無特長度和序列的DNA序列和片段。例如Tung在檢測轉(zhuǎn)基因食品中的啟動子CaMV35S時用到PCR檢測技術(shù)；HUANG等在檢測乳酸中的轉(zhuǎn)基因成分時用到巢式PCR檢測技術(shù)；王保珍（哈爾濱醫(yī)科大學）研制出了用于轉(zhuǎn)基因食品的定性檢測中的電化學傳感器；朱德斌在檢測CaMV35S啟動子是使用電化學發(fā)光的PCR檢測技術(shù)；PCR定性轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)具有敏感性高的特點，但是會出現(xiàn)一些假性的現(xiàn)象：a模板的影響因素：如反應中提取的脫氧核糖核酸在抑制因子和產(chǎn)品深加工核酸時造成破壞都會造成假陰性反應；b當作物被花椰菜花葉病毒感染和擁有35S的啟動子或因農(nóng)桿菌感染而帶有終止子nos時，PCR呈現(xiàn)出假陽性反應；c在運輸過程中或者是收獲的時候，或轉(zhuǎn)基因食品在和非轉(zhuǎn)基因食品的產(chǎn)生交叉污染時，也可以使測試結(jié)果不準確。　　(2)定量PCR技術(shù)許多國家在食品轉(zhuǎn)基因成分含量有嚴格要求，因此定量檢測是十分的必要的。定量聚合酶鏈反應檢測技術(shù)是為根據(jù)參考物為標準進行的檢測，分析PRC的最終產(chǎn)物或者是過程的監(jiān)測，進一步的評價轉(zhuǎn)基因食品中樣品的靶基因的拷貝數(shù)量。用于檢測轉(zhuǎn)基因食品定量聚合酶鏈反應通常用的是：半定量聚合酶鏈反應，實時熒光定量聚合酶鏈反應和多重定量聚合酶鏈反應技術(shù)。如Hardegger用競爭性定量聚合酶鏈反應檢測的35S的啟動子和終止的；王燕梅和kuribaraH用實時聚合酶鏈反應檢測熒光定量相玉米片中的轉(zhuǎn)基因成分；Garcia-canas等用毛細管凝膠電泳分析和鑒定轉(zhuǎn)基因成分的產(chǎn)品的方法進行檢測。競爭性的PRC也是一種終點型的測試，測試過程的第一步驟為先構(gòu)建包含修改過的內(nèi)部標準DNA片段（競爭脫氧核糖核酸），并檢測核酸擴增片段共同進行擴增，因為競爭DNA和待檢測的在大小上存在顯著的差異，在瓊脂糖凝膠電泳的作用下可以將它們分開，結(jié)束產(chǎn)品的相對數(shù)量和啟動量額是成正比的，它可用于定量檢測的實施。競爭性的PRC檢測的弱點是風險更大的污染PRC。實時定量的聚合酶鏈反應檢測顯著較高的靈敏度比競爭性的聚合酶鏈反應(PRC)，它可以檢測樣品中含有2微克（每克轉(zhuǎn)基因）的基因數(shù)量，不管是處理過的還是加工過的和混合樣品都能進行測試檢測。此外，實時熒光(PRC)聚合酶鏈反應是使用的閉管熒光分析，不需電泳反應的后續(xù)的處理步驟，可有效消除檢測中的核酸交叉污染。多重定量(PRC)聚合酶鏈反應在同一反應體系中，可以同時為兩個或更多的轉(zhuǎn)基因片段的進行檢測，可以提高效率，節(jié)省資金，但這種方法的難度卻較大。　　(3)印跡法

不管是確定外源基因的Southem印跡方法或是確定印跡核糖核酸的Northern印跡方法，基本過程的待測程序都是將待檢測的核酸段是轉(zhuǎn)移到一個特定部分的固相的支持物上，并進一步的結(jié)合到固相支持物上，然后使用核酸探針事前標記過的，檢測將要檢測的核酸。如周學榮和李建粵等使用Southern印跡方法檢測轉(zhuǎn)基因水稻以及轉(zhuǎn)基因油菜作物；黃曉等用Northern印跡法檢測轉(zhuǎn)基因煙草表達中的番茄花葉病毒移動蛋白。這種印跡方具有是快速方便和易于操作，在同時間可以對多個優(yōu)勢樣品進行測試，但由于對測試樣品之前，不能對樣品進行擴增放大，使檢測靈敏度較低。